来源: 最后更新:22-08-19 02:14:56
1、外植体的采集及处理:9-10月挖无病害的地下茎,切成1-1.5厘米长根并消毒处理。2、诱导外植体生长与分化:接种前要用刀去除接触过消毒液的断面,露出新鲜组织。3、继代增殖:每30天左右继代一次,增殖系数控制在3倍左右。4、生根与移栽:根长约1.0cm时,可驯化移植。
一、外植体的采集及处理
秋天(9~10月)挖地黄地下直径约1.0cm,挖无病虫害的强根茎,用洗涤灵和自来水洗净,切成1.0~1.5cm长根。在超净工作台上用75%的酒精冲洗30%,用0.1%的水银消毒7~8毫米,用无菌水冲洗5~6次。
二、诱导外植体生长与分化
用灭菌剪刀或解剖刀去除与消毒液接触的断面,并暴露新鲜组织。根段立即接种到培养基MS6-BA0.05~2.0mg/LNAA0.01~0.5mg/L。请注意不要把下端朝上。接种的材料在温度24℃左右、光12h/d、光强度1500lx下培养。接种1周后,根部开始出现黄绿芽点,15d左右出现不定芽,30-40天后芽出现2.0~3.0cm。
三、继代增殖
取下上述芽苗,接种培育基MS6-BA1.5mg/LNAAO.1mg/L,10分钟后芽苗基部产生芽丛(3~5分钟),20~30分钟后新芽生长到1.0~2.0分钟左右。每30天左右继代一次,增殖系数控制在3倍左右,保持芽苗良好增殖,同时获得壮苗。
四、生根与移栽
将高达3.0cm左右、成长结实的无根苗分为单株接种到培育基础12MSNAAA0.05mg/L,一般在15天后产生大量根系。根长约1.0cm时,可驯化移植。方法是将试管苗放在温度25℃、湿度75%的玻璃温室里,用镊子轻轻地从瓶子里取出苗,用稀释0.125%~0.142%药液的百菌清洗剩下的琼脂培养基,移植到消毒处理的基质(珍珠岩:蛭石=1:1)。移植后的温度保持在24~25℃,湿度在80%以上,成活率在90%以上。
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